重组羧肽酶 B 应用于 CP 制备工艺中的研究

刘梅香，牛 丁

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【摘要】通过 RT-PCR 克隆小鼠羧肽酶 B（CPB）的原核 cDNA 编码序列，并重新组装到原核表达质粒 PT7-473 中，其 在大肠杆菌中表达。SDS-PAGE 电泳和灰度扫描显示质粒中 6His 的表达量占总蛋白的 35%。在变性条件下使用 Ni-NTA 柱纯 化 CPB 原。在归化液中稀释再归化后，具有酶活性的 CPB 经胰蛋白酶（tps）分离，经 DEAE-FF 纯化，得到比活为 13.5U/mg 的纯 CPB（28.5mg/L）。对胰岛素原 c 肽（CP）三聚体 tps 脱 CPB 的水解产物进行高效反相液相色谱分析，证明重组 CPB 可 以替代提取的 c 肽羧肽酶提取物制备 c 肽。

【关键词】羧肽酶原 B；CPB；融合表达；分离纯化；CP

【中图分类号】TQ464    【文献标识码】A  【DOI】10.12325/j.issn.1672- 5336.2022.16.036